| Kirillica | laban.rsBibliotekaJu. A. Shushkevich → Strukturnaja modifikacija belkov soi kak perspektivnaja bio- i nanotekhnologija

Strukturnaja modifikacija belkov soi kak perspektivnaja bio- i nanotekhnologija

[Jurijj Anatol'evich Shushkevich foto]
Avtor: Ju. A. Shushkevich,
OOO «Kubanskijj soevyjj koncentrat»

Soavtory: M. L. Domoroshhenkova (GNU VNIIZh Rossel'khozakademii)
i D. Khajjes (Hayes General Technologies, Izrail')

Samyjj ehffektivnyjj metod

1. Vvedenie v problematiku

Reshenie problemy deficita belka — odnojj iz global'nykh problem, stojashhikh pered chelovechestvom, — nevozmozhno bez ispol'zovanija syr'evykh resursov rastitel'nogo proiskhozhdenija, prezhde vsego poluchaemykh pri pererabotke semjan maslichnykh i zernobobovykh kul'tur. V ehtom kontekste belkam soi tradicionno otvodilas' vedushhaja rol'. Vysokoe soderzhanie ipishhevaja cennost' soevogo belka pri razvitykh tekhnologijakh vysokobelkovykh produktov — soevojj muki, koncentratov i izoljatov — obespechili ikh shirokoe ispol'zovanie v pishhevojj promyshlennosti i v pitanii naselenija. V 2005 godu mirovoe potreblenie soevogo izoljata sostavljalo 350 tys. tonn, soevogo koncentrata 500 tys. tonn[1]. Po prognozu LMC International Ltd., odnojj iz vedushhikh britano-amerikanskikh konsaltingovykh kompanijj v oblasti pishhevojj promyshlennosti i sel'skokhozjajjstvennykh rynkov, k 2020 godu mirovojj rynok soevykh izoljatov vyrastet do 1,6 mln. tonn, soevykh koncentratov — do 5,6 mln. tonn. Prognoziruetsja, chto do poloviny rynka kazeina i kazeinatov i chast' rynka syvorotochnykh belkov moloka mozhet byt' zameshhena soevymi belkovymi produktami[2].

[Strukturnaja modifikacija belkov soi kak perspektivnaja bio- i nanotekhnologija]
Foto: © 2010 Pul's agrarnogo rynka

Soevye belki pishhevogo kachestva imejut razlichnoe naznachenie. Tak, dlja vospolnenija deficita belkov zhivotnogo proiskhozhdenija, problema kotorogo osobenno ostro stoit v razvivajushhikhsja stranakh, dostatochno ispol'zovanie soevojj muki, koncentrata i izoljata, proizvodimykh po klassicheskim tekhnologijam, izvestnym s serediny XX veka. V to zhe vremja dlja udovletvorenija sprosa na belkovye ingredienty s razvitymi funkcional'no-tekhnologicheskimi svojjstvami i uluchshennymi mediko-biologicheskimi kharakteristikami, neobkhodimy novye tekhnologicheskie reshenija. V poslednie 10-15 let byli issledovany i podtverzhdeny profilakticheskie i lechebnye svojjstva soevykh peptidov, flavonoidov, oligosakharidov i drugikh fitokhimicheskikh soedinenijj, soderzhashhikhsja v semenakh soi i produktakh ikh pererabotki. V svjazis ehtimna povestku dnja vstal vopros ob aktivizacii sootvetstvujushhikh biologicheski aktivnykh faktorov v massovo vypuskaemykh belkovykh produktakh, o povyshenii ikh specifichnosti i o sozdanii promyshlennykh tekhnologijj ikh izvlechenija, ochistki i koncentrirovanija.

2. Strukturnaja modifikacija belkov

Odnim iz perspektivnykh i ehkonomicheski ehffektivnykh napravlenijj razvitija i uluchshenija kharakteristik pishhevykh belkov javljaetsja ikh strukturnaja modifikacija.

Pervye upominanija o strukturnojj modifikacii soevykh belkov otnosjatsja k 1940-m godam, kogda v SShA velis' issledovanija po polucheniju ustojjchivykh k nagrevaniju penoobrazovatelejj dlja voenno-morskogo flota. Dlja ehtogo ispol'zovalsja fermentativnyjj gidroliz soevojj muki pri nizkikh znachenijakh pH (2.0-3.5), v rezul'tate kotorogo obrazovyvalis' polipeptidy s molekuljarnojj massojj ne menee 14000 Da. Do pojavlenija sinteticheskikh poverkhnostno-aktivnykh veshhestv «bobovyjj sup» schitalsja luchshim penoobrazovatelem po pokazateljam sily vspenivanija i ustojjchivost'ju protiv osedanijav uslovijakh vysokojj temperatury[3].

Na segodnjashnijj den' pod strukturnojj modifikaciejj belkovykh soedinenijj soi mozhno ponimat' poluchenie v processe upravljaemojj destrukcii i/ili napravlennojj khimicheskojj, fermentativnojj ili fizicheskojj modifikacii iskhodnykh biopolimerov soevogo belka ili produktov ikh gidroliza novykh belkovykh proizvodnykh, v tom chisle bolee nizkomolekuljarnykh belkov i polipeptidov s uluchshennymi ili principial'no novymi funkcional'nymi i mediko-biologicheskimi svojjstvami i s izmenennymi fiziko-khimicheskimi kharakteristikami.

Termin «strukturnaja modifikacija belkovykh soedinenijj» v otechestvennykh nauchnykh publikacijakh po sostojaniju na segodnjashnijj den' vstrechaetsja poka chto dostatochno redko,obychno ispol'zujutsja bolee obshhee opredelenie «modifikacija belkov» ili, kak chastnyjj sluchajj, «gidroliz belkov», v to vremja kak v zarubezhnojj nauchnojj literature termin «structural modification ofprotein» shiroko rasprostranen[4].

Strukturnye kharakteristiki soevykh belkov dovol'no khorosho izucheny[5]. Soevye belki mozhno razdelit' na gruppy polipeptidov, razlichajushhikhsja po molekuljarnojj masse. V zavisimosti ot skorosti sedimentacii oni uslovno podrazdeljajutsja na 2S, 7S, 11S i 15S frakcii. V svoju ochered', kazhdaja frakcija javljaetsja slozhnojj smes'ju belkov, razlichajushhikhsja po svoim kharakteristikam.

Osnovnymi frakcijami, opredeljajushhimi funkcional'nost' soevogo belka, javljajutsja 7S v- i g-konglicininy (M.m. 150-175 kD) i 11S-gicinin (M.m. 320-350 kD), na dolju kotorykh prikhoditsja bolee 80% summarnykh belkov.

Pri ehlektroforeze po Laemli glicinin i konglicininy raspadajutsja na otdel'nye polipeptidy:

V kachestve osnovnogo instrumenta upravljaemojj destrukcii globulinov soi ispol'zuetsja fermentativnyjj gidroliz, kotoryjj mozhet byt' dopolnen membrannojj fil'traciejj[6], gomogenizaciejj,ehmul'sionnojj ehkstrakciejj[7], izoehlektricheskim fokusirovaniem i promyshlennojj zhidkostnojj khromatografiejj[8]. V rjade sluchaev strukturnaja modifikacija mozhet osushhestvljat'sja posredstvom reakcijj plasteinovogo sinteza, pozvoljajushhimi izmenit' funkcional'nye svojjstva ili uluchshit' aminokislotnyjj sostav produkta (naprimer, povysit' soderzhanie odnojj ili neskol'kikh aminokislot, udalit' «gor'kie» aminokisloty)[9]. Zavershajushhejj stadiejj tekhnologicheskogo processa (esli produkt ne realizuetsja v zhidkom vide) javljaetsja raspylitel'naja sushka produkta pri special'nykhtemperaturnykh rezhimakh.

Strukturnaja modifikacija predpolagaet sushhestvennoe izmenenie fizicheskikh i khimicheskikh kharakteristik belka, raskrytie ili formirovanie novykh svojjstv. Nizhe privoditsja kratkaja kharakteristika togo, kak i kakim obrazom primenjaemye pri strukturnojj modifikacii metody vlijajut na svojjstva konechnykh produktov.

Pri gidrolize kak takovom proiskhodit ukorachivanie molekul otdel'nykh polipeptidov, vysvobozhdenie i aktivacija novykh khimicheskikh svjazejj, v chastnosti, SH-svjazejj i t.d., «vysvobozhdenie» ili ehksponirovanie na poverkhnost' otdel'nykh gidrofil'nykh ili gidrofobnykh grupp, v rezul'tate chego poluchaemye soedinenija obladajut novymi, otlichnymi ot iskhodnogo substrata, svojjstvami rastvorimosti, zhiroehmul'giruemosti,vlago- i zhirouderzhanija, antioksidantnymi svojjstvami, reologicheskimi kharakteristikami.

Poluchaemye v processe strukturnojj modifikacii peptidy i polipeptidy klassificirujutsja v nanodiapazone ot 5 do 100 nm.

Vysokaja substratnaja specifichnost' primenjaemykh pri gidrolize ehnzimov pozvoljaet napravlenno vesti reakcii po strogo opredelennym svjazjam, dobivajas' poluchenija opredelennykh grupp peptidov i polipeptidov, kotorye v posledujushhem mogut byt' otseparirovany s neobkhodimojj stepen'ju chistoty.

Krome togo, narjadu s reakcijami gidroliza pri ispol'zovanii nekotorykh fermentov mogut katalizirovat'sjai reakcii sshivanija belkov poperechnymi svjazjami — tak, v processe gidroliza, kataliziruemogo transglutaminazojj,obrazujushhiesja «sshivki» mezhdu ostatkami lizina i glutamina v polipeptidnojj cepi usilivajut zhelirujushhie svojjstva i mogut byt' ispol'zovany dlja izgotovlenija mikrokapsul dlja immobilizovannykh fermentov[10].

Ispol'zovanie pri gidrolize shhelochnykh reagentov pozvoljaet poluchat' proteinaty, naibolee rasprostranennymi sredi kotorykh javljajutsja proteinaty natrija, kal'cija i kalija; kotorye obladajutraznymi funkcional'nymi svojjstvami. V rabote L. V. Gaponovojj bylo pokazano, chto zhirouderzhivajushhaja i vodouderzhivajushhaja sposobnosti maksimal'ny u soevykh proteinatov kalija, penoobrazujushhaja sposobnost' — u proteinata natrija, zhiroehmul'girujushhaja sposobnost' — u soevykh proteinatov kal'cija.[11] To est' imeet mesto vyrazhennoe vlijanie kationov shhelochnykh i shhelochnozemel'nykh metallov na funkcional'nye svojjstva proteinatov soevogo belka.

Izvestno,chto konformacija belka vlijaet na ego fiziko-khimicheskie svojjstva. Konformacija belka chuvstvitel'nak osobennostjam aminokislotnojj posledovatel'nosti i kharakteristikam rastvoritelja. Svorachivanie polipeptida pri formirovanii prostranstvennojj struktury opredeljaetsja termodinamicheskimi faktorami.Dlja vodorastvorimykh belkov bol'shinstvo nepoljarnykh ostatkov nakhoditsja vnutri, a bol'shinstvo poljarnykh ostatkov na poverkhnosti globuly, nakhodjashhejjsja v kontakte s rastvoritelem. Ehtim dostigaetsja minimizacija svobodnojj ehnergii belkovojj strukturypri dannykh uslovijakh i svojjstvakh rastvora. V obshhem sluchae, v globuljarnykh belkakh gidrofobnye ostatki nakhodjatsja vnutri, a gidrofil'nye bol'shejj chast'ju na poverkhnosti. Poehtomu nativnye globuljarnye belki obychno obladajut vysokojj rastvorimost'ju. V processe promyshlennogo poluchenija ochishhennykh frakcijj belkov v rezul'tate denaturacii v belke proiskhodjat strukturnye izmenenija, privodjashhie k snizheniju egorastvorimosti i izmeneniju funkcional'nosti. Tak, nagrevanie belkovykh rastvorov privodit k uvelicheniju doli gidrofobnykh uchastkov na poverkhnosti[12].V processe gidroliza i fizicheskikh vozdejjstvijj — sdvigovykh deformacijj pri gomogenizacii — proiskhodit izmenenie prostranstvennojj struktury s uvelicheniem udel'nojj konformacionnojj ehnergii belkovykh chastic. V rezul'tate ehtikh processov nepoljarnyegidrofil'nye ostatki (R-gruppy serina, treonina, tirozina, cisteina, glicina i dr.) okazyvajutsja v bol'shejj stepeni ehksponirovannymi na poverkhnost', chto povyshaet rastvorimost'[13] ehtikh chastic. Obrazovanie belkovykh chastic s preobladaniem gidrofobnykh R-grupp (alanina, lejjcina, izolejjcina, valina i prolina), pozvoljaet poluchat' frakcii s povyshennymi zhiroehmul'girujushhimi kharakteristikami. Otmetim takzhe, chto po dannym tajjvanskikh uchenykh dazhe bez dorogostojashhego razdelenija po preobladajushhim aminokislotnym ostatkam koncentrat soevykh peptidov javljaetsja prevoskhodnym ehmul'gatorom i mozhet byt' ehmul'girovan s vodojj i zhirom v sootnoshenii 1:7:1 s sokhraneniem stabil'nojj ehmul'sii, tem samym polnost'ju zamenjaja lecitin v kachestve ehmul'gatora[14]. Inymi slovami, poluchaemyjj produkt s nanochasticami belka oboikh tipov mozhet sbalansirovano obladat' kak svojjstvom rastvorimosti, tak i javljat'sja ehmul'gatorom.

Uzhe upominavshiesja sdvigovye deformacii v processe gomogenizacii pri vysokom davlenii ne tol'ko fizicheski obespechivajut destrukciju belkovykh globul napolipeptidnye fragmenty, no i sposobstvujut ikh stabilizacii i snizheniju agregirovanija.Imejutsja svedenija, chto v rezul'tate fizicheskogo vozdejjstvija sdvigovykh deformacijj pri gomogenizacii na poverkhnosti belkovykh chastic ehksponirujutsja SH-gruppy cisteina, obespechivajushhie vyrazhennyjj antioksidantnyjj ehffekt produkta (SH-gruppy vystupajut kak konkurirujushhie s drugimi substratami ob"ekty okislenija, kotorye ne dajut svobodnykh radikalov i fakticheski gasjat cepnuju reakciju svobodnoradikal'nogo okislenija[15]).

Blagodarjaumen'sheniju molekuljarnojj massy poluchaemykh belkovykh chastic znachitel'no vozrastaet ikh termostabil'nost', povyshaetsja ustojjchivost' k ionnojj sile rastvora (koncentracii soli).

Takim obrazom, pri provedenii strukturnojj modifikacii belkov vozmozhno primenenie shirokogo nabora biotekhnologicheskikh, khimicheskikh i fizicheskikh metodov vozdejjstvija,a takzhe metodov vydelenija, ochistki i koncentrirovanija, pozvoljajushhikh poluchat' veshhestva s zadannymi kharakteristikami kak v smesevykh sistemakh, tak v vide substancijj s neobkhodimym urovnem chistoty.

Neobkhodimo otmetit', chto v literature takzhe upominaetsja ob ehksperimente, provedennom tajjvan'skimi uchenymi po polucheniju nanochastic soevogo belka s razmerami menee 100 nm putem sverkhskorostnogo mekhanicheskogo razmola neposredstvenno soevykh bobov. Pri ehtom poluchennye nanochasticy soevogo belka, svobodnye ot polisakharidov i fosfolipidov, obladali povyshennojj biologicheskojj aktivnost'ju, v chastnosti, sposobstvovali povysheniju immunnogo statusa u laboratornykh myshejj[16]. Po-vidimomu, vsjakijj sposob«vysvobozhdenija» peptidov soi vne zavisimosti ot primenjaemojj dlja ehtogo tekhnologii obespechivaet poluchenie produktov s vyrazhennym projavleniem novykh khimicheskikh i biologicheskikh svojjstv. Tajjvan'skie issledovateli nichego ne soobshhajut o stoimosti nanochastic soevogo belka, poluchennykh pri mekhanicheskom razmole, no, sudja po vsemu, stoimost' takojj tekhnologii na porjadok prevoskhodit stoimost' gidroliznogo processa. Uchityvaja stremitel'noe razvitie biotekhnologii i pojavlenie na rynke vse bol'shego kolichestva fermentnykh preparatov s vysokojj substratnojj specifichnost'ju i aktivnost'ju, process strukturnojj modifikacii na osnove gidroliza javljaetsja na segodnjashnijj den' naibolee ehkonomicheski perspektivnym.

3. Vozmozhnosti strukturnojj modifikacii v formirovanii novykh funkcional'nykh svojjstv produktov

Vyshe byl dan analiz sistemy vozdejjstvijj, kotorye mogut primenjat'sja v processe strukturnojj modifikacii belkov soi. Ehti vozdejjstvija pozvoljajut upravljat' funkcional'no-tekhnologicheskimi i mediko-biologicheskimi svojjstvami konechnykh produktov.

Nizhe v tablice privoditsja perechen' tekhnologicheskikh vozdejjstvijj, neobkhodimykh dlja dostizhenija zadannykh svojjstv produktov v processe strukturnojj modifikacii belkov soi

Tablica 1: Perechen' tekhnologicheskikh vozdejjstvijj
Svojjstva Tekhnologicheskie vozdejjstvija, primenjaemye dlja dostizhenija svojjstva
Strukturnaja modifikacija belkov osushhestvljaetsja na urovne izmenenijj svojjstv chastic...
Rastvorimost' v vode Gidroliz, kataliziruemyjj fermentamiSdvigovye deformacii v processe gomogenizacii pri vysokom davlenii
Uderzhanie zhira i vody v ehmul'sii Gidroliz + gomogenizacija + separirovanie chastic s gidrofobnymi R-gruppamiili –gidroliz v shhelochnojj srede s obrazovaniem proteinata kalija
Ehmul'girujushhaja sposobnost' Gidroliz + gomogenizacija + separirovanie chastic s gidrofobnymi R-gruppamii/ili –gidroliz v shhelochnojj srede
Povyshennaja antioksidantnaja aktivnost' Gidroliz s ispol'zovaniem fermentov s substratnojj specifichnost'jupo SH-svjazjam + gomogenizacija (vysvobozhdenie SH-svjazejj)
Povyshennaja termicheskaja stabil'nost' Prodolzhitel'nyjj gidroliz s vysokojj stepen'ju gidroliza (DH)
Ustojjchivost' k soli (NaCl) v pishhevykh prilozhenijakh Gidroliz s obrazovaniem proteinata natrija
Ustojjchivost' protiv aglomeracii Gomogenizacija pri vysokom davlenii
Maksimizacija soderzhanija specificheskikhpeptidov Gidroliz s ispol'zovaniem fermentov s zadannojj substatratnojj specifichnost'ju, ul'trafil'tracija
Maksimizacija soderzhanija svobodnykh aminokislot Maksimal'no glubokijj gidroliz s DH?100%, ul'trafil'tracija
Mikrokapsulirovanie belkovykh nanochastic Ispol'zovanie «sshivajushhikh» reakcijj, kataliziruemykh transglutaminazojj
Sozdanie belkovykh nanochastic zadannogo sostava Plasteinovyjj sintez

Obsuzhdaemaja strukturnaja modifikacija belkov osushhestvljaetsja na urovne izmenenijj svojjstv chastic nanometrovogo masshtaba s ispol'zovaniem raznoobraznykh khimicheskikh, biokhimicheskikh i fizicheskikh metodov.

Poluchaemye fragmenty belkovykh chastic nanorazmernogo masshtaba obladajut svojjstvami, kotorye naprjamuju zavisjat ot ikh razmera i atomarnojj struktury poverkhnosti. To est' dannyjj process otnositsja k oblasti nanotekhnologijj. Pri ehtom, khotja osnovnaja chast' preobrazovanijj osushhestvljaetsja po skheme top-bottom, chast' iz nikh predpolagaet obratnyjj process bottom-top (mikrokapsulirovanie, plasteinovyjj sintez).

Takim obrazom, strukturnaja modifikacija belkov na osnove biokataliza otkryvaet shirokie vozmozhnosti dlja poluchenija veshhestv s zaranee zadannymi upravljaemymi kharakteristikami.

4. NIR po strukturnojj modifikacii, osnovnye avtory i publikacii, vnedrenie

Aktivnaja nauchno-issledovatel'skaja rabota po tematike strukturnojj modifikacii belkov nachalas' v 1970-kh godakh, odnovremenno s issledovanijami po plasteinovomu sintezu, odnako znachitel'naja chast' rabot po dannojj tematike v SSSR byla zasekrechena. Naibolee krupnym zarubezhnym rezul'tatom, poluchivshim shirokoe kommercheskoe primenenie s 1980 goda, stala tekhnologija refoldinga soevogo koncentrata s cel'ju vosstanovlenija ego rastvorimosti v vodnykh rastvorakh (v processe spirtovojj obrabotki, javljajushhejjsja neot"emlemojj chast'ju tekhnologii poluchenija soevogo koncentrata, belok denaturiruet i utrachivaet svojjstvo rastvorimosti). V processe refoldinga strukturnajamodifikacija osushhestvljaetsja v uslovijakh centrobezhnojj gomogenizacii pri povyshennojj temperature v shhelochnykh uslovijakh[17].Dejjstvujushhimi faktorami pri refoldinge vystupajut khimicheskijj gidroliz soevogo globulina v prisutstvii shhelochi i sdvigovye deformacii, dostigaemye pri gomogenizacii, obespechivajushhie intensifikaciju reakcii gidroliza, obespechivajushhee vysvobozhdenie gidrofil'nykh grupp i snizhajushhie aglomeracionnuju sposobnost' chastic gotovogo belka.

V SSSR issledovanija po strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj rastitel'nogo syr'ja osushhestvljalis' v ramkakh zakrytojj tematiki NIR NPO «Maslozhirprom».Odnojj iz naibolee polnykh nauchnykh publikacijj po dannojj tematike stala dissertacionnaja rabota M.L.Domoroshhenkovojj «Razrabotka tekhnologii poluchenija modificirovannykh belkov iz soevogo shrota s ispol'zovaniem biotekhnologicheskikh metodov» (1991 g.)[18]. V ukazannojj rabote bylo izucheno vlijanie prirody proteaz i stepeni gidroliza na fiziko-khimicheskie i funkcional'nye svojjstva soevykh belkov, issledovany tekhnologicheskie rezhimy processa fermentativnojj modifikacii, issledovany khimicheskie, funkcional'nye i mediko-biologicheskie svojjstva modificirovannykh soevykh belkov.

Byla proslezhena izbiratel'nost' gidroliza otdel'nykh sub"edinic soevykh globulinov pri dejjstvii raznykh proteaz.

Pri dejjstvii shhelochnykh i slaboshhelochnykh proteaz gidrolizu podvergalis' sledujushhie polipeptidy:

Pri dejjstvii nejjtral'nojj proteazy Bac. Subtilis, obladajushhejj substratnojj specifichnost'ju k gidrofobnym aminokislotam s N-konca rasshhepljaemojj svjazi, chastichnomu rasshhepleniju podverglis' vse polipeptidy.

Pri dejjstvii kislykh proteaz:

Razlichija v dinamike gidroliza i v polipeptidnykh spektrakh fermentativno modificirovannykh belkov byli obuslovleny raznojj substratnojj specifichnost'ju ispol'zovannykh fermentov i osobennostjami biokhimicheskogo stroenija otdel'nykh sub"edinic soevykh globulinov. Takim obrazom, uzhe v 90-e gody byla pokazana vozmozhnost' napravlennojj destrukcii belkovykh biopolimerov.

K bol'shomu sozhaleniju, v bolee pozdnie gody fundamental'nye i prikladnye nauchno-issledovatel'skie raboty po tematike strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj v nashejj strane provodilis' ochen' ogranichenno. Iz opublikovannykh rabot otechestvennykh uchenykh po lokal'nym aspektam sootvetstvujushhejj tematiki mozhno, ne pretenduja na polnotu, upomjanut' vypolnennye v GU NII Pitanija RAMN i Moskovskom gosudarstvennom universitete prikladnojj biotekhnologii rabotu po polucheniju i issledovaniju fermentativnogo gidrolizata izoljata soevykh belkov[19], vypolnennoe v Sankt-Peterburgskom gosudarstvennom universitete nizkotemperaturnykh i pishhevykh tekhnologijj issledovanie po tipam khimicheskikh reakcijj, kataliziruemykh mikrobnym fermentnom transglutaminazojj na substratakh, predstavlennykh globulinami soi[20],issledovanie proteoliza syvorotochnykh belkov moloka s primeneniem ehlektroaktivacii, vypolnennye v Severokavkazskom gosudarstvennom tekhnicheskom universitete[21] i nekotorye drugie. Provedenie bolee masshtabnykh NIR v Rossii sderzhivaetsja otsutstviem celevogo gosudarstvennogo finansirovanija i potencial'no zainteresovannykh v ikh rezul'tatakh predprijatijj po glubokojj pererabotke soi i polucheniju syvorotochnykh belkov moloka.

Takim obrazom, tekhnologii strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj v nashejj strane do sikh por ne vyshli za predely laboratorijj.

V to zhe vremja v zarubezhnykh stranakh dannoe napravlenie aktivno razvivalos'. V 2002-2004 gg nachalos' promyshlennoe proizvodstvo gidrolizatov soevykh belkov na zavodakh po glubokojj pererabotke soi kompanijj ADM (SShA), Solae (SShA) i Solbar (Izrail'). Bol'shuju rol' v nauchno-tekhnologicheskom obespechenii sootvetstvujushhikh proizvodstv sygral izrail'skijj biotekhnolog D.Khajjes (D.Chajuss). V techenie 2005-2008 gg. analogichnye proizvodstva pojavilis' v Kitae i Malajjzii. Proizvodstvo gidrolizatov soevogo belka osushhestvljaet kompanija Fuji Oil (Japonija). Po mneniju specialistov, rabotajushhikh v dannojj oblasti, v nastojashhee vremja mirovojj centr nauchnykh issledovanijj po tematike fermentativnogo gidroliza belkov nakhodjatsja v Japonii, na Tajjvane, a takzhenarashhivaetsja intensivnost' issledovatel'skikh rabot v Kitae i v Juzhnojj Koree[22].

V nachale 2000-kh godov v nauchnojj literature pojavilis' publikacii ob unikal'nykh biologicheski aktivnykh svojjstvakh nizkomolekuljarnogo peptida lunazina, vydelennogo iz semjan soi ili iz soevykh belkov. Lunazin sostoit iz 43 aminokislotnykh ostatkov, imeet molekuljarnuju massu 5.45 ± 0.25 kD i javljaetsja otdel'nojj sub"edinicejj 2S al'bumina. Coderzhanie prirodnogo lunazina v semenakh soi ochen' neznachitel'no, no ego koncentracija rezko vozrastaet v rezul'tate gidroliza belkov[23][24][25].

V 2009 godu amerikanskaja firma Soy Labs, LLC zajavila o nachale kommercializacii dvukh vidov preparatov, LunaSoy® iLunasin XP®, osnovannykh na ehkstrakte lunazina, kotorye mozhno ispol'zovat' v funkcional'nykh produktakh pitanija i napitkakh.

V ehtom kontekste neobkhodimo otmetit', chto proizvodstvo biologicheski aktivnykh dobavok na osnove vydelennykh soevykh peptidov v Kitae perezhivaet na segodnjashnijj den' nastojashhijj bum. No iz-za togo, chto prakticheski vse proizvodstvo orientirovano na vnutrennijj rynok, potrebitel'skaja informacija i nauchnye publikacii na anglijjskom ili russkom jazykakh prakticheski nedostupny. Takzhe otsutstvujut tochnye svedenija o primenjaemykh tekhnologijakh (izvestno lish', chto v ikh osnove lezhit upravljaemyjj gidroliz), o biokhimicheskom sostave i chistote produktov. Izvestnymi proizvoditeljami preparatovpeptidov v Kitae javljajutsja kompanii, zanimajushhiesja proizvodstvom pishhevykh soevykh belkov, takie kak Harbin Ho-Tech Soybean Food Co Ltd, kompanija Guangzhou Hisoya Biological Science,Lynyi Shansong Bilogical Products Co.i drugie.

Neobkhodimo otmetit' postavlennyjj v SShA interesnyjj opyt po polucheniju biopolimerov putem obrazovanija kataliziruemykh transglutaminazojj svjazejj mezhdu molekulami syvorotochnogo belka moloka i globulinami soi. Nesmotrja na bol'shuju molekuljarnuju massu 200 tys. Da (issledovateli ne podvergali iskhodnye belki destrukcii) poluchennyjj biopolimer obladal novymi funkcional'nymi svojjstvami[26]. Vpolne ochevidno, chto primenenie podobnogo mekhanizma polimerizacii po otnosheniju k nanorazmernym strukturirovannym belkovym chasticam pozvolit sozdavat' veshhestva s novymi kharakteristikami.

Interes k tekhnologii strukturnojj modifikacii belkovykh soedinenijj soi svjazan s zhelaniem vedushhikh mirovykh proizvoditelejj kak uluchshit' funkcional'nye svojjstva vypuskaemykh imi pishhevykh belkov, tak i osushhestvit' vydelenie i vypusk v tovarnykh kolichestvakh opredelennykh tipov soevykh polipeptidov i peptidov s podtverzhdennymi mediko-biologicheskimi svojjstvami. Pri ehtom poslednjaja motivacija igraet znachitel'no bolee vazhnuju rol', poskol'ku rech' idet o fakticheskom perekhode proizvoditelejj iz sektora pishhevykh ingredientov (food ingredients) v farmakologicheskijj sektor, kharakterizujushhijjsja znachitel'no bol'shimi urovnjami sprosa i dobavlennojj stoimosti.

V silu ehtogo obstojatel'stva kolichestvo otkrytykh zarubezhnykh publikacijj po temam, otnosjashhimsja k nanostrukturnojj modifikacii soevykh belkov, ves'ma neveliko. Issledovanija nosjat, v osnovnom, korporativnyjj kharakter, ikh rezul'taty obnarodujutsja, v luchshem sluchae, chastichno i posle zavershenija kommercializacii novykh produktov.

V minuvshem 2009 godu byli obnarodovany predvaritel'nye rezul'taty provedennykh v SShA issledovanijj, pokazyvajushhie «iskljuchitel'nuju cennost' ispol'zovanija polipeptidov pri sozdanii nanostrukturnykh ob"ektov»[27]. Prinimaja vo vnimanie to obstojatel'stvo, chto polipeptidy soevogo belka v ramkakh imejushhikhsja tekhnologijj mogut proizvodit'sja v znachitel'nykh promyshlennykh ob"emakh, proizvodstvo sootvetstvujushhikh nanomaterialov bukval'no srazu zhe posle zavershenija NIOKR mozhet stat' massovym i ehkonomicheski ehffektivnym.

Takim obrazom, strukturnaja modifikacija belkov soi javljaetsja ehffektivnym metodom pri sozdanii veshhestv s novymi svojjstvami, shiroko vostrebovannykh v razlichnykh tekhnologijakh i sferakh chelovecheskojj dejatel'nosti.


Spisok istochnikov i literatury

  1. Soybean Meal Evaluation to 2020. Report prepared by LMC International Ltd. for USB, Dec. 2006.
  2. Tam zhe. Dopolnitel'no — http://www.lmc.co.uk/Expertise.aspx?Id=4, «Market opportunities for Soya Protein Concentrate»
  3. Gunther, R. C., J. Amer. Oil: Chem. Soc.56, 345 (cit. po: «Prakticheskoe rukovodstvo po pererabotke i ispol'zovaniju soi» pod red. Ehriksona D.,. M., 2002, S. 154)
  4. Sm., naprimer: Wu, Wei; Zhang, Caimeng; Hua, Yufei. Structural modification of soy protein by the lipid peroxidation product malondialdehyde. Journal of the Science of Food and Agriculture, Volume 89, Number 8, June 2009 , pp. 1416-1423.
  5. Niels C. Nielsen. Structure of Soy Proteins. In New Protein Foods, vol. 5, p. 27-63. Academic Press, Inc. 1985
  6. W. U, N. Hettiarachchy, M. Qi «Hydrophobicity, Solubility, and Emulsifying Properties of Soy Protein Peptides Preparated by Papain Modification and Ultrafiltration». J. Amer. Oil: Chem. Soc, vol.75 (1998), no.7
  7. Boon-Sean, S. Ichikawa and others. “Preparation of Protein-Stabilized b–Carotene Nanodispersions by Emulsification-Evaporation Method”. J. Amer. Oil: Chem. Soc, vol.84 (2007), p. 1053-1062
  8. K. Sato, K. Hashimoto. Bioactive peptides — large-scale preparation. American Oil Chemist Society.2007, vol. 18; NUMB 11, pages 756-760.
  9. V. M. Belikov , M. Ju. Gololobov. «Plasteiny. Poluchenie, svojjstva i ispol'zovanie v pitanii». Uspekhi khimii, 48, 1684 (1979).
  10. A. G. Shlejjkin i dr. «Primenenie transglutaminazy v pishhevykh tekhnologijaz». Izvestija SPbGUNiPT, №1, 2006, S.136.
  11. Gaponova L. V. Razrabotka tekhnologii proizvodstva novykh form belkovykh produktov iz semjan soi dlja ispol'zovanija v molochnojj promyshlennosti. Avtoreferat dis. Na soisk. Uchenojj stepeni kand. Tekhn. Nauk. Leningrad,1980 g. (DSP) S.11
  12. Protein Quality and the Effects of Processing. Edited by R. Dixon Phillips and John W. Finley. Marcel Dekker, Inc., 1989, p. 125
  13. Food Proteins. Edited by J. E. Kinsella, W. G. Soucie. AOCS, 1989. P. 32.
  14. T. Ligo. Soy Peptides: A new ingredient for aqua feed. Aqua Feeds: Formulation and Beyond. Vol. 1, issue 3, 2004, page 21
  15. A. P. Golikov i dr. «Svobodnoradikal'noe okislenie i serdechno-sosudistaja patologija: korrekcija antioksidantami». Lechashhijj vrach, №4, 2003
  16. Yin-Ching Chan, etc. Nanonized black soybean enhances immune response in senescence-accelerated mice. International Journal of Nanomedicine 2009:4 27-35
  17. Howard, P. A., M. F. Canpbell, and D. T. Zollinger,US Patent 4,234,620 (1980). (cit. po: «Prakticheskoe rukovodstvo po pererabotke i ispol'zovaniju soi» pod red. Ehriksona D.,. M., 2002, S.143)
  18. rabota vypolnena v NPO «Maslozhirprom» (g.Sankt-Peterburg), kotoryjj pozdnee byl pereimenovan v Vserossijjskijj nauchno-issledovatel'skijj institut zhirov RASKhN.
  19. S. N. Zorin i dr. «Poluchenie i kharakteristika fermentativnogo gidrolizata izoljata belkovykh belkov». Voprosy pitanija, tom75. M., 2006.
  20. A. G. Shlejjkin i dr. «Primenenie transglutamenazy v pishhevykh tekhnologijaz». Izvestija SPbGUNiPT, №1, 2006, S. 135-137.
  21. Donskojj N. S. i dr. «Gidroliz syvorotochnykh belkov kak nanobiotekhnologija». Materialy XXXVIII nauchno-tekhnicheskojj konferencii SevKavGTU za 2008 g., T. 1.
  22. R. Molin i dr. Belkovye gidrolizaty v pishhevykh produktakh. «Pishhevye ingredienty. Syr'e i dobavki». №2, 2005. S. 75
  23. Hyung J. Jeong, Jae H. Park, Yi Lam, and Ben O. de Lumen. Characterization of lunasin isolated from soybean. J Agric Food Chem. 2003 Dec 31;51(27):7901-6
  24. Elvira Gonzalez de Mejia, Miguel Vbsconez, Ben O. de Lumen, and Randall Nelson. Lunasin concentration in different soybean genotypes, commercial soyprotein, and isoflavone products. J Agric Food Chem. 2004 Sep 22;52(19):5882-7.
  25. De Mejia E. G.; Bradford T.; Hasler C. The anticarcinogenic potential of soybean lectin and lunasin. Nutr Rev. 2003 Jul;61(7):239-46.
  26. M. Yildrim, etc. Properties of Biopolymers from Cross-linking Whey Protein Isolate and Soyberan 11 S Globulin. Journal of Food Science, vol. 61, No 6, 1996. P. 1129.
  27. http://2009.igem.org/Modular_protein_nanostructures.html

© 2012 Centr strategicheskojj kon"junktury. 11.3.2012 g.